本发明公开了一种葡萄糖耐受的β-葡萄糖苷酶及其表达,该葡萄糖耐受的β-葡萄糖苷酶是具有SEQ ID No:2所示的氨基酸序列的多肽,其基因编码序列如SEQ ID No:1所示。本发明还公开了含有该葡萄糖耐受的β-葡萄糖苷酶的表达菌株。本发明所述的β-葡萄糖苷酶来自海洋未培养微生物,具有较好的葡萄糖耐受性,可以改善木质纤维素的发酵工艺,并且可生产出高达20-30%浓度的果汁;其葡萄糖抑制常数为1000mM,本发明葡萄糖耐受的β-葡萄糖苷酶在
本发明属于基因工程领域,具体涉及葡萄糖耐受β‑葡萄糖苷酶apbgl1a及其基因和应用。本发明提供的葡萄糖耐受性β‑葡萄糖苷酶apbgl1a,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2。葡萄糖耐受性β‑葡萄糖苷酶apbgl1a,对葡萄糖的抑制常数Ki值高达1886mM,最适温度为45℃,最适pH为6.6,且该酶在大肠杆菌中表达时,部分能分泌到胞外,对SDS、离子液、乙醇等耐受性较强,可应用于纤维素乙醇生产
本发明涉及一种葡萄糖耐受的纤维寡糖酶的应用。一种葡萄糖耐受的纤维寡糖酶CHU_2268在降解纤维素中的应用,所述葡萄糖耐受的纤维寡糖酶CHU_2268的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该酶不仅可以降解纤维二糖,对纤维寡糖也有较高的降解能力,而且具有较高的葡萄糖耐受性,在生物能源等工业中具有比较大的应用潜力。
本发明主要利用定点突变技术构建来源于特异腐质霉的β‑葡萄糖苷酶的突变体菌株,获得了一种葡萄糖耐受能力提高的β‑葡萄糖苷酶突变体,其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。相同条件下,本发明突变体可在400mmol/L葡萄糖的激活下最高达到249.61%的相对活力,在葡萄糖浓度为2mol/L时,其相对活力仍能达到98.37%,具有良好的葡萄糖耐受能力。
本发明主要利用定点突变技术构建来源于特异腐质霉的β‑葡萄糖苷酶的突变体菌株,获得了一种葡萄糖耐受能力提高的β‑葡萄糖苷酶突变体T331Q,其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。相同条件下,本发明突变体可在400mmol/L葡萄糖的激活下最高达到239.0%的相对活力,在葡萄糖浓度为1.5mol/L时,其相对活力仍能达到112.61%,具有良好的葡萄糖耐受能力。
本申请提供了具备高水解活性和高葡萄糖耐受性的β‑葡萄糖苷酶突变体及其应用。所述突变体具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。所述突变体的比活力均显著高于野生型,葡萄糖耐受性得到的显著的提升。以纤维二糖为底物,在270 mM葡萄糖条件下,突变体酶活性比野生型提高2.81倍和1.5倍。此外,所述突变体酶在以热纤梭菌上清液进行体外糖化时,添加突变体酶的产糖量高于野生型26.01%‑35.86%和12.86%‑20.60%。这说明,与野生型CaBGL相比,本申请所述的β‑葡萄糖苷酶突变体的催化活性和葡萄糖耐受性有了大幅度提高,为整合生物糖化工艺性能的提升提供了新的酶组件和研究基础,具有广泛的应用前景,有望建立新一代的CBS